苏格兰国立美术馆的藏品以包括意大利、法国、荷兰、英国等国在内的欧洲古典绘画最为丰富，14世纪到19世纪期间的绘画、素描、版画也为数不少。在世界美术史上赫赫有名的拉斐尔、丁托列托、普桑、伦勃朗以及英国画家雷诺兹、透纳和荷加斯等人的作品均有收藏。美术馆的重要收藏还有委拉斯贵之和维米尔等印象派和后印象派画家的精美作品以及精彩的苏格兰绘画。苏格兰国立美术馆最大的看点应该是普桑的作品，如《圣凯瑟琳的神秘婚礼》，16世纪50年代为西班牙国王菲利普二世创作的《狄安娜和埃克特翁》以及《狄安娜和卡利斯忒》等都十分精彩，引人驻足。

1850年，苏格兰政府依据相关法令，将1819年成立的苏格兰艺术奖励协会所收购的苏格兰现代画家作品、38幅意大利古典绘画，和1826年成立的苏格兰皇家艺术学院收集的英国绘画以及爱丁堡大学于1835年收到的一批遗赠绘画，合组成国家美术馆。这批收藏也成为今天苏格兰国立美术馆古典部分藏品的核心。国立美术馆初创时期，曾和苏格兰皇家学院共同使用如今的馆舍。1912年苏格兰皇家学院迁至他处，经过改建后的国家美术馆终于有了属于自己的独立的展示空间。1975年至1978年又进行了地下室扩建，展览面积进一步扩大。

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